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| 标准编号 | GB 5009.265-2021 (GB5009.265-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | | | 行业 | 国家标准 | GB 5009.265-2021
食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定
(National Food Safety Standard Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Food)
1 范围
本标准第一法规定了食品中16种多环芳烃的气相色谱-质谱测定方法;第二法规定了食品中15种
多环芳烃的液相色谱测定方法。
本标准第一法适用于粮食及其制品、肉及其制品、水产及其制品、动植物油脂及其制品中16种多环
芳烃(苯并[c]芴、苯并[a]蒽、环戊并[c,d]芘、 、5-甲基 、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[j]荧蒽、
苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二
苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘)的测定;适用于婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品中4种多环芳烃(苯并
[a]蒽、 、苯并[b]荧蒽、苯并[a]芘)的测定。
本标准第二法适用于粮食及其制品、肉及其制品、水产及其制品、蔬菜、动植物油脂中15种多环芳
烃(萘、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、 、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]苝)的测定。
2 原理
试样中多环芳烃经溶剂提取,氢氧化钾乙醇溶液皂化,固相萃取柱净化,浓缩后用气相色谱-质谱联
用仪测定,同位素内标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。
3.1.2 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。
3.1.3 丙酮(C3H6O):色谱纯。
3.1.4 环己烷(C6H12):色谱纯。
3.1.5 正己烷(C6H14):色谱纯。
3.1.6 异辛烷(C8H18):色谱纯。
3.1.7 无水乙醇(C2H6O):色谱纯。
3.1.8 氨水(NH3·H2O):质量分数约25%。
3.1.9 无水乙醚(C4H10O)。
3.1.10 石油醚(C5H12O2):沸程为30℃~60℃。
3.1.11 氢氧化钾(KOH)。
3.1.12 无水硫酸钠(Na2SO4):使用前400℃下烘烤2h后放干燥器内待用。
3.2 试剂配制
3.2.1 氢氧化钾乙醇溶液(0.3mol/L):称取1.68g氢氧化钾,用100mL无水乙醇超声溶解,临用
现配。
3.2.2 氢氧化钾乙醇溶液(1.5mol/L):称取8.40g氢氧化钾,用100mL无水乙醇超声溶解,临用
现配。
3.2.3 环己烷-乙酸乙酯溶液(1+1):将环己烷和乙酸乙酯按1∶1(体积比)混合均匀。
3.2.4 二氯甲烷-乙酸乙酯溶液(1+1):将二氯甲烷和乙酸乙酯按1∶1(体积比)混合均匀。
3.2.5 丙酮-异辛烷溶液(1+1):将丙酮和异辛烷按1∶1(体积比)混合均匀。
3.3 标准溶液
3.3.1 多环芳烃标准溶液
多环芳烃标准溶液(含苯并[c]芴、苯并[a]蒽、环戊并[c,d]芘、 、5-甲基 、苯并[b]荧蒽、苯并
[k]荧蒽、苯并[j]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、二苯并[a,l]
芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘,10.0μg/mL或相应浓度):经国家认证并授予标
准物质证书的标准溶液,-18℃下避光保存。多环芳烃CAS号见附录A。
3.3.2 同位素多环芳烃内标溶液
同位素多环芳烃内标溶液(至少含D12-苯并[a]蒽、D12- 、D12-苯并[b]荧蒽、D12-苯并[a]芘、D12-茚并[1,2,3-c,d]芘、D14-二苯并[a,h]蒽、D12-苯并[g,h,i]苝,100.0μg/mL或相应浓度),-18℃下避
光保存。同位素多环芳烃内标CAS号见附录A。
警告---多环芳烃是已知的致癌、致畸、致突变的物质,并且致癌性随着苯环数的增加而增加。进
行标准溶液配制等操作时应特别注意安全防护,应在通风柜中操作,尽量减少暴露。
3.4 标准使用液配制
3.4.1 多环芳烃标准使用液(500.0ng/mL):吸取多环芳烃标准溶液(10.0μg/mL)0.50mL于10mL
容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储瓶中,4℃下避光
密封保存,保存期3个月。
3.4.2 多环芳烃标准使用液(100.0ng/mL):吸取多环芳烃标准使用液(500.0ng/mL)2.0mL于10mL
容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储瓶中,4℃下避光
密封保存,保存期3个月。
3.4.3 同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL):吸取同位素多环芳烃内标溶液(100.0μg/mL)
0.10mL于50mL容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储
瓶中,4℃下避光密封保存,保存期1年。
3.4.4 多环芳烃标准系列工作液:取8个锥底进样瓶,分别吸取多环芳烃标准使用液(100.0ng/mL)
20.0μL、40.0μL、50.0μL、80.0μL和多环芳烃标准使用液(500.0ng/mL)20.0μL、40.0μL、50.0μL、
100.0μL,再各加同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL)100.0μL,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)补充
体积至200μL,多环芳烃标准系列工作液浓度为10.0ng/mL、20.0ng/mL、25.0ng/mL、40.0ng/mL、
50.0ng/mL、100.0ng/mL、125.0ng/mL、250.0ng/mL,内标为100.0ng/mL,临用现配。
4 仪器和设备
4.1 气相色谱-四极杆质谱联用仪(GC-MS):配电子轰击离子源(EI源)。
4.2 电子天平:感量为0.01g、0.001g。
4.3 高速粉碎机。
4.4 均质器。
4.5 恒温水浴装置。
4.6 超声波清洗器。
4.7 氮吹仪。
4.8 高速离心机:转速≥10000r/min。
4.9 涡旋振荡器。
4.10 精密移液器。
4.11 固相萃取小柱(苯乙烯二乙烯基苯聚合物)或等效净化柱:6mL,300mg。
5 分析步骤
5.1 样品前处理
5.1.1 试样制备
5.1.1.1 粮食及其制品
取样品200g~500g,用高速粉碎机将其充分粉碎,混合均匀后分出100g左右,装于洁净样品袋
或瓶中,密封标识后-18℃下冷冻保存,供检测用。
5.1.1.2 肉及其制品、水产及其制品、蔬菜
取样品200g~500g,将其可食部分先切碎,经均质器充分搅碎,取100g左右装于洁净样品袋或
瓶中,密封标识后-18℃下冷冻保存,供检测用。
5.1.1.3 动植物油脂及制品
取散装动植物油脂及制品100g~200g,装于洁净样品瓶中,密封标识后放阴凉处保存,供检测用。
定型包装动植物油脂贴标签放阴凉处保存,供检测用。
5.1.1.4 婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品
取需粉碎样品200g~500g,用高速粉碎机将其充分粉碎,混合均匀后分出100g左右,装于洁净
样品袋或瓶中,密封标识后4℃下冷藏保存,供检测用。
不需粉碎的婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品贴标签放阴凉处保存,供检测用。
5.1.2 试样提取
5.1.2.1 粮食及其制品
称取试样5g(精确至0.001g),置于50mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用
液(200.0ng/mL)振荡混合后静置30min,加入5g无水硫酸钠、20mL环己烷-乙酸乙酯混合溶液(1+
1),涡旋提取1min,超声提取15min,以10000r/min离心3min,吸取上清液至15mL预称重的离心
管中(精确至0.01g),45℃水浴下氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.01g),提取
物待皂化。
若提取物质量大于1g,则称出1g提取物(精确至0.01g),置于另一15mL具塞离心管中待皂化。
5.1.2.2 肉及其制品、水产及其制品
称取试样5g(精确至0.001g),置于50mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用
液(200.0ng/mL)振荡混合后静置30min,加入20g无水硫酸钠,用金属角匙搅拌分散,加入20mL环
己烷-乙酸乙酯混合溶液(1+1),涡旋提取1min,进一步超声提取15min,10000r/min离心3min,吸
取上清液至15mL预称重的离心管中,45℃水浴下用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量
(精确至0.01g),提取物待皂化。
若提取物质量大于1g,则称出1g提取物(精确至0.01g),置于另一15mL具塞离心管中待皂化。
5.1.2.3 动植物油脂及制品
称取试样0.5g~1g(精确至0.001g),置于15mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内
标使用液(200.0ng/mL),待皂化。
5.1.2.4 婴幼儿配方乳粉
称取试样2g(精确至0.001g),置于50mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用
液(200.0ng/mL),加10mL水,涡旋溶解,加2mL氨水充分混匀,在65℃±5℃水浴中放置10min,
取出冷却至室温。加入10mL无水乙醇,缓慢混匀,加入8mL无水乙醚,漩涡振荡5min,再加入8mL
石油醚,漩涡振荡5min,10000r/min离心5min,吸出上层有机相至15mL预称重的离心管中,
45℃水浴下用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.01g),提取物待皂化。
5.1.2.5 婴幼儿辅助食品
称取2g(精确至0.001g)试样,置于50mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用
液(200.0ng/mL),加10mL水、10mL无水乙醇,涡旋溶解,加入8mL无水乙醚,漩涡振荡5min,再
加入8mL石油醚,漩涡振荡5min,以10000r/min离心5min,吸出上层有机相至15mL预称重的离
心管中,45℃水浴中用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.01g),提取物待皂化。
5.1.3 皂化
5.1.3.1 提取物质量小于或等于0.2g(精确至0.01g),加5mL0.3mol/L氢氧化钾乙醇溶液,涡旋混
匀,室温放置5min,加4mL水、5mL正己烷,涡旋提取2min,10000r/min离心2min,上层正己烷提
取液待净化。
5.1.3.2 提取物质量在0.2g~1g(精确至0.01g)之间,加入5mL1.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液,加盖
涡旋混匀,放置70℃±2℃水浴中进行皂化3min。皂化完成取出用自来水冷却至室温,加4mL水、
5mL正己烷,涡旋提取2min,以10000r/min离心2min,上层正己烷提取液待净化。
5.1.3.3 动植物油试样中加入5mL1.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液(固体油脂试样先放置50℃水浴融
化后加入),加盖涡旋混匀,放置70℃±2℃水浴中进行皂化3min。皂化完成取出用自来水冷却至室
温,加4mL水、5mL正己烷,涡旋提取2min,10000r/min离心2min,上层正己烷提取液待净化。
注:苯并[c]芴对碱不稳定,测定苯并[c]芴时,皂化时间视油脂质量而定,以1g提取物皂化3min按比例折算。
5.1.4 净化
在固相萃取小柱上加1g左右无水硫酸钠,依次用3mL二氯甲烷、3mL正己烷淋洗活化柱子,活
化结束后吸取全部正己烷提取液转移到固相萃取柱上,流速控制在1.0mL/min左右,待提取液全部通
过填料层后,先用5mL正己烷淋洗除杂,再用5mL二氯甲烷-乙酸乙酯溶液(1+1)洗脱,收集洗脱液
于10mL锥底玻璃试管内。洗脱液在40℃水浴中用氮气吹干,加0.1mL丙酮-异辛烷溶液(1+1)涡
旋溶解残留物,并转移至锥底进样瓶中,供GC-MS测定。
5.1.5 空白试验
除不加试样外,采用与试样完全相同的分析步骤进行。
5.1.6 平行试验
按上述步骤,对同一试样进行平行试验测定。
5.2 仪器参考条件
5.2.1 气相色谱参考条件:
5.2.1.1 色谱柱:DB-EUPAH毛细管柱:柱长20m,内径0.18mm,膜厚0.14μm或相当色谱柱。
5.2.1.2 进样口温度:280℃。
5.2.1.3 载气:氦气,纯度≥99.999%。
5.2.1.4 进样体积:1μL~2μL,不分流进样。
5.2.1.5 溶剂延迟:16.5min。
5.2.1.6 柱温程序:初温80℃,保持2min,以10℃/min升至250℃,保持2min,以8℃/min升至
315℃,保持5min,最后以20℃/min升至320℃,保持5min。
5.2.1.7 流量程序:0.7mL/min保持32min,再以5mL/min从0.7mL/min升至1.5mL/min至结束。
5.2.2 质......
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