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| 标准编号 | SC/T 3053-2019 (SC/T3053-2019) | | 中文名称 | 水产品及其制品中虾青素含量的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | Determination of astaxanthin in fish and fishery products by high performance liquid chromatography method | | 行业 | 水产行业标准 (推荐) | | 中标分类 | X20 | | 国际标准分类 | | | 字数估计 | 10,148 | | 发布日期 | 2019-08-01 | | 实施日期 | 2019-11-01 | | 标准依据 | 农业农村部公告第196号 | SC/T 3053-2019: 水产品及其制品中虾青素含量的测定 高效液相色谱法
SC/T 3053-2019 英文名称: Determination of astaxanthin in fish and fishery products by high performance liquid chromatography method
中华人民共和国水产行业标准
水产品及其制品中虾青素含量的测定
高效液相色谱法
中华人民共和国农业农村部 发布
本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起平。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。木文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出。
本标准由全国水产标准化技术委员会加工分技术委员会(SAC/TC 156/SC 3)归口。
本标准起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所、辽渔南极磷虾科技发展有限公司、山东鲁华
海洋生物科技有限公司。
本标准主要起草人:孙伟红、邢丽红、王联珠、冷凯良、丛心缘、刘冬梅、范宁宁、付树林、李兆新、李风
玲、郭莹莹、朱文嘉、彭吉星。
水产品及其制品中虾青素含量的测定高效液相色谱法
1 范 围
本标准规定了水产品及其制品中虾青素含量的髙效液相色谱测定方法的原理、使用的试剂及仪器、测
定步骤、结果计算方法、方法灵敏度、准确度和精密度。
本标准适用于鱼类、甲壳类及虾粉、磷虾油等制品中虾青素含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 30891 水产品抽样规范
3 原理
样品中待测物采用丙酮或二氯甲焼-甲醇混合溶液提取，经碱皂化，使其中的虾青素酯转化成游离态
的虾青素,液相色谱分离,紫外检测器测定，外标法定量。
4 试剂
4 .1 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水 D
4 .2 丙酮(CH3COCH3):色谱纯。
4.3 二氯甲烷(CH2C12 ):色谱纯。
4.4 甲醇(CH3OH):色谱纯。
4.5 叔丁基甲醚[CH3OC(CH3 )3]:色谱纯。
4.6 磷酸(H3P04):优级纯。
4.7 氢氧化钠(NaOH):优级纯。
4.8 2,6-二叔丁基对甲酣(C15 H240):化学纯。
4.9 捵(12)。
4.10 硫代硫酸钠(Na2S203 •5H20) O
4.11 无水碳酸钠(Na2C03)。
4.12 无水硫酸镁(MgS04 ):650°C灼烧 4 h，在千燥器闪冷却至室温，储于密封瓶中备用。
4.13 1%磷酸溶液(WV):量取10 mL磷酸和 990 mL水，混匀后备用。
4.14 二氯甲焼-甲醇溶液:量取 250 mL二氯甲烷和750 mL甲醇，加入 0.5 g 2,6-二叔丁基对甲酚，混
匀后备用。
4.15 0.02 mol/L氢氧化钠甲醇溶液:称取 0.4 g 氢氧化钠，用甲醇溶解并稀释至500 mL，混匀后备用。
4.16 0.6 mol/L磷酸甲醇溶液(V/VO:量取鱗酸600 ML，用甲醇稀释至10 mL。
4.17 0.01 g/mL碘-二氯甲烷溶液:称取a 1 g 碘，用二氯甲烷溶解并稀释至10 mL，混勻后备用。
4.18 0.1 mol/L硫代硫酸钠溶液:称取 1.3 g 硫代硫酸钠，加入 0.01 g 无水碳酸钠，溶于 50 mL水中，
缓缓煮沸10 min，冷却后备用。
4.19 全反式虾青素标准品:纯度>95%。
4.20 全反式虾青素标准储备溶液:准确称取全反式虾青素标准品约10 mg，用丙酮溶解并定容于 500
mL 容量瓶中，此溶液浓度为 20 yg/mL?充氮密封?置于一18°C冰箱中避光保存，有效期 1 个月。
4.21 虾青素几何异构体的制备：准确吸取全反式虾青素标准储备液（4.20)适量，用丙酮稀释配成
10 pg/mL的标准溶液，移取 2 mL 标准溶液于 10 mL具塞试管中，加入 3 mL二氣甲烷?混匀，加入 50 yL
0.01 g/mL碘-二氯甲烷溶液(4.17)，充分涡旋，密封置于自然光下反应 15 min，然后加入1 mL 0.1 mol/L硫
代硫酸钠溶液(4.18)充分振荡以脱除多余的碘后，静置分层取下相，氮气吹干后加入 1 mL丙酮溶解，现用
现配。
6 .3 皂化和净化
准确移取 2 mL 样品提取液于 10 mL 具塞试管中，加入 2.9 mL 0.02 mol/L NaOH 甲醇溶液
(4.15)，涡旋混合，充氮密封，在 4°C?5°C冰箱中反应过夜 12 h 16 h。然后在试样溶液中加人 0.1 mL
0.6 mol/L磷酸甲醇溶液（4.16 )中和剩余的碱，再加人 100 mg PSA 填料，涡旋混合，静置 5 mim 过
0.2 pm微孔滤膜后，待测。
6 .4 测定
6 .4.1 色谱条件
a) 色谱柱:C3。色谱柱，250 mmX 4.6
h) 柱温:25°C;
6.4.2 标准曲线绘制
准确移取适量全反式虾青素标准储备溶液(4.20)用试样定容溶剂稀释成浓度分别为 0.1 pg/mL、
0.5/ig/mL、1.0/xg/mL、2.0/iig/mL、5.0/ig/mL、10.0/xg/mL的标准工作液，现用现配。
6.4.3 液相色谱测定
6.4.3.1 定性方法
分别注入 20/xL 全反式虾青素标准工作液(6.4.2)、虾青素几何异构体(4.21)和试样溶液(6.3)，按
6.4.1列出的色谱条件进行液相色谱分析测定，根据虾青素几何异构体色谱图中 13-顺式虾青素、全反式
虾青素和 9-顺式虾青素 3种虾青素同分异构体组分的保留时间定性。色谱图参见附录 A。
6.4.3.2 定量方法
根据试样溶液中虾青素的含量情况，选定峰面积相近的全反式虾青素的标准工作液单点定量或多点
校准定量，试样测定结果以3种奸青素同分异构体的总和计，外标法定量，同时标准工作液和样液的响应
值均应在仪器检测的线性范围之内。
7 结果计算
试样中虾青素的含骨（X )按式(1)计算，保留 3位有效数字。
8......
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