搜索结果: GB 5009.252-2016, GB5009.252-2016
| 标准编号 | GB 5009.252-2016 (GB5009.252-2016) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品中乙酰丙酸的测定 | | 英文名称 | Method for determination of β-acetyl propionyl acid in soy sauce | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X09 | | 字数估计 | 9,90 | | 发布日期 | 2016-08-31 | | 实施日期 | 2017-03-01 | | 旧标准 (被替代) | SB/T 10417-2007 | | 标准依据 | 国家卫生和计划生育委员会公告2016年第11号 | GB 5009.252-2016: 食品安全国家标准 食品中乙酰丙酸的测定
GB 5009.252-2016 英文名称: Method for determination of β-acetyl propionyl acid in soy sauce
中华人民共和国国家标准
GB 5009.255-2016
1 范围
本标准规定了食品中果聚糖含量的离子色谱法测定方法。
本标准适用于乳及乳制品、婴幼儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品、固体饮料、配制酒中单独添加的
低聚果糖、多聚果糖或菊粉含量的测定。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 试样预处理
5.1.1.1 固体样品:用“四分法”缩分至约200g样品经粉碎机粉碎,混匀,备用。
5.1.1.2 液体样品:将试样装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中,摇匀,备用。
5.1.2 提取准确称取1g~5g(精确至0.001g,至少含有果聚糖5mg)试样于150mL锥形瓶中,加入80℃±1℃热水约50mL,置于80℃±1℃恒温水浴摇床中,150r/min振摇15min后,取出,冷却至室温,转
移至100mL容量瓶中,用水分三次冲洗锥形瓶,定容,摇匀,溶液经滤纸过滤或者离心,滤液或上清液
依据标准曲线的线性范围确定稀释倍数,备用。
取上述备用样液200μL于10mL具塞玻璃试管中,估算样液中可能的蔗糖含量,按照每毫克蔗糖
加入300μL蔗糖酶溶液,旋涡振荡混匀,置于40℃±1℃恒温水浴摇床中,150r/min振摇60min后,
加入300μL硼氢化钠溶液,旋涡振荡混匀,置于40℃±1℃恒温水浴摇床中,150r/min振摇30min
后,取出,冷却至室温。加入750μL乙酸溶液,静置10min。估算样液中可能的果聚糖含量,按照每毫
克果聚糖加入1.2mL果聚糖酶溶液,旋涡振荡混匀,置于40℃±1℃恒温水浴摇床中,150r/min振摇
30min后,取出,冷却至室温。转移至10mL容量瓶中,用水分三次冲洗玻璃试管,定容,摇匀。
活化净化柱,试样溶液依次通过0.22μm水相滤膜和净化柱,弃去前面3倍柱体积洗脱液,收集后
面洗脱液待测。同时做试剂空白试验。
5.2 仪器参考条件
5.2.1 仪器参考条件1
5.2.1.1 色谱柱:可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换色谱柱。
5.2.1.2 淋洗液:A:水;B:氢氧化钠溶液(200mmol/L);C:氢氧化钠(150mmol/L)乙酸钠(500mmol/L)
混合溶液。梯度洗脱条件见表1。
5.3 标准曲线的制作
将标准曲线工作溶液从低到高依次注入离子色谱仪中,测定相应的响应值(峰面积),以标准工作液
中果糖的质量浓度为横坐标,以响应值(峰面积)为纵坐标,绘制标准曲线。标准溶液色谱图参见附录A。
5.4 试样溶液的测定
将试样溶液注入离子色谱仪中,记录色谱图。根据保留时间定性,记录峰面积,根据标准曲线得到
待测液中果糖的质量浓度。同时测定试剂空白。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留三位有效数字。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
8 其他
当称样量为5g时,检出限为0.4g/kg,定量限为2.0g/kg。
附 录 B
酶活力测定方法
B.1 蔗糖酶活力测定方法
B.1.1 原理
蔗糖酶(Sucrase,EC3.2.1.26)又称转化酶,可以从果糖末端切开蔗糖的果糖糖苷键,使蔗糖水解生
成葡萄糖和果糖,葡萄糖和果糖是还原糖,其含量可通过3,5-二硝基水杨酸比色法测定,从而度量酶活
力的大小。由于蔗糖酶在碱性条件下极易失活,所以可用碱终止反应。3,5-二硝基水杨酸和还原糖共
热后生成棕红色氨基化合物,在最大吸收波长540nm处测定,在一定浓度范围内吸光值与还原糖含量
呈线性关系,因此可用于还原糖含量的测定,从而测定蔗糖酶的活力大小。
蔗糖酶活力定义为:在37℃、pH6.5条件下,每分钟水解产生1μmol葡萄糖所需的酶量(活性)定义为1个酶活力单位。
B.1.2 试剂除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
B.1.2.1 葡萄糖标准物质(C6H12O6):纯度≥99.0%。
B.1.2.2 蔗糖(C12H22O11):纯度≥99.0%。
B.1.2.3 氢氧化钠(NaOH)。
B.1.2.4 马来酸(C4H4O4)。
B.1.2.5 二硝基水杨酸(C7H4N2O7)。
B.1.2.6 酒石酸钾钠(C4H4KNaO6)。
B.1.2.7 苯酚(C6H5OH)。
B.1.2.8 亚硫酸钠(Na2SO3)。
B.1.3 试剂配制
B.1.3.1 2.5μmol/mL葡萄糖标准溶液:准确称取0.045g(精确至0.1mg)80℃烘干至恒重的葡萄糖
标准物质于50mL烧杯中,加入约10mL热水,待葡萄糖溶解后,冷却至室温,用水稀释至100mL容
量瓶中,摇匀,4℃保存,可放置1个月。
B.1.3.2 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取40g氢氧化钠(精确至0.01g),溶于水并稀释至1000mL,室温下可放置2个月。
B.1.3.3 马来酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH6.5):称取1.16g马来酸(精确至0.01g)于150mL烧杯
中,加入约70mL水溶解,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH 至6.5,用水稀释至100mL,4℃保存,可放置3个月。
B.1.3.4 1.0mol/L蔗糖溶液:准确称取34.2g(精确至0.01g)蔗糖,用约50mL水溶解,用马来酸钠缓
冲溶液稀释至100mL,摇匀,用时现配。
B.1.3.5 氢氧化钠溶液(2mol/L):称取80g氢氧化钠(精确至0.01g),用水溶解并稀释至1000mL,室温下可放置2个月。
B.1.3.6 3,5-二硝基水杨酸溶液:将6.3g二硝基水杨酸和262mL2mol/LNaOH溶液,加到500mL
含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g苯酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后用水稀释至中备用。
B.1.4 仪器和设备
B.1.4.1 恒温水浴锅:控温精度±1℃。
B.1.4.2 分光光度计:带1cm玻璃比色皿。
B.1.4.3 微量移液器:100μL、1000μL。
B.1.5 分析步骤
B.1.5.1 待测酶的制备
准确称取测试酶样品约0.1g(精确0.001g),用0.1mol/L马来酸钠缓冲溶液溶解并稀释,控制酶活力浓度在1U/mL~5U/mL范围内。
B.1.5.2 测定
B.1.5.2.1 葡萄糖标准曲线的制作
取6支10mL刻度试管,编号,按表B.1配制不同浓度的葡萄糖标准溶液:
B.2.1 原理
果聚糖酶(Inulinase,EC3.2.1.80)又称菊粉酶,是能够水解β-2,1-D-果聚糖果糖苷键的一类水解
酶,使菊粉水解生成葡萄糖和果糖,葡萄糖和果糖是还原糖,其含量可通过3,5-二硝基水杨酸比色法测
定,从而度量酶活力的大小。3,5-二硝基水杨酸和还原糖共热后生成棕红色氨基化合物,在最大吸收波
长540nm处测定,在一定浓度范围内吸光值与还原糖含量呈线性关系,因此可用于还原糖含量的测
定,从而测定果聚糖酶的活力大小。
果聚糖酶活力定义为:在55℃、pH4.5条件下,每分钟水解产生1μmol果糖所需的酶量(活性)定义为1个酶活力单位。
B.2.2 试剂
B.2.2.1 果糖标准物质(C6H12O6):纯度≥99.0%。
B.2.2.2 菊粉:纯度≥90.0%。
B.2.2.3 冰乙酸(CH3COOH)。
B.2.2.4 三水乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。
B.2.2.5 二硝基水杨酸(C7H4N2O7)。
B.2.2.6 酒石酸钾钠(C4H4KNaO6)。
B.2.2.7 苯酚(C6H5OH)。
B.2.2.8 亚硫酸钠(Na2SO3)。
B.2.3 试剂配制
B.2.3.1 2.5μmol/mL果糖标准溶液:准确称取0.045g(精确至0.1mg)80℃烘干至恒重的果糖标准
物质于50mL烧杯中,加入约10mL热水,待果糖溶解后,冷却至室温,用水稀释至100mL容量瓶中,
摇匀,4℃保存,可放置1个月。
B.2.3.2 乙酸溶液(200mmol/L):吸取0.6mL冰乙酸,用水稀释至50mL,4℃保存,可放置2个月。
B.2.3.3 乙酸钠溶液(200mmol/L):称取1.36g三水乙酸钠(精确至0.01g),溶于水并稀释至50mL,
4℃保存,可放置2个月。
B.2.3.4 乙酸钠缓冲溶液(pH4.5):吸取14mL乙酸溶液和11mL乙酸钠溶液混合,并用水稀释至50mL,用时现配。
B.2.3.5 10%菊粉溶液:准确称取10g(精确至0.01g)菊粉,用约50mL热水溶解,冷却至室温,用乙
酸钠缓冲溶液稀释至100mL容量瓶中,摇匀,4℃保存,可放置1个月。
B.2.3.6 氢氧化钠溶液(2mol/L):称取80g氢氧化钠(精确至0.01g),溶于水中并稀释至......
|